Определение группы крови при помощи стандартных сывороток и цоликлонов

Содержание:

Методика определение группы крови стандартными сыворотками

  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать. Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин. При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрёстным способом

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Резус-фактор.

Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так назы­ваемый резус-фактор.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Ускоренный способ определения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С. Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—). Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.

Определение группы крови.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания крови. На белой тарелке на расстоянии 3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки. Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В (III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой. Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови. В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет. Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III). Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB (IV) группы.

Полезные советы

Определение группы и резус-фактора крови с использованием цоликлонов считается одним из самых простых и доступных методов, поэтому широко применяется в лабораториях разного уровня. Кроме того, такой анализ дает достоверные результаты. Однако в некоторых случаях они бывают ложными, а причиной этому становится несоблюдение нескольких правил. Простая инструкция по применению цоликлонов и работа с ними позволит избежать получения недостоверных результатов и необходимости проводить исследование заново:

  • хранить реагенты в холодильнике, при температуре от 2 до 8 градусов, а распечатанный флакон использовать в течение 30 суток;
  • исследования проводятся при комнатной температуре, а в слишком жарком помещении рекомендуется периодически охлаждать стеклянную поверхность планшета;
  • обозначать на планшете разные цоликлоны маркером, поскольку их цвет после добавления крови быстро исчезает;
  • соблюдать правильные пропорции реагентов: если крови будет слишком много, реакция агглютинации эритроцитов будет мало выражена;
  • не допускать смешивания капель жидкости, в которых уже присутствуют разные типы цолкиклонов — в таком случае реакцию придется проводить заново;
  • обозначать окончательный результат не менее, чем через 3 минуты после начала реакции.

Важно также соблюдать последовательность действий во время анализа. Так, если стеклянную поверхность не раскачивать, даже при отсутствии реакции склеивания эритроциты будут расположены в краевой зоне капли

Это может стать причиной неправильной интерпретации результатов. При определении группы крови необходимо учитывать острые и хронические заболевания, которые наблюдаются у пациента. При патологиях печени и органов кроветворной системы, а также болезнях, которые протекают по типу сепсиса, может происходить явление патагглютинации. Эритроциты будут склеиваться даже при контакте с обычным физиологическим раствором. Напротив, при лейкозе кровяные клетки не отреагируют на присутствие антител, и агглютинация не произойдет.

Цоликлоны — это важные реагенты, которые используются ежедневно в гематологических лабораториях. Они позволяют быстро и безошибочно определить группу крови и ее резус без дополнительного оборудования и специальных навыков

Однако важно выполнять простой алгоритм, чтобы результаты анализа действительно были достоверными

Расшифровка результатов

Определение типа крови с помощью цоликлонов происходит при расшифровке результатов анализов. Если в образце нет реакции склеивания, значит, в анализе нет агглютиногена данного типа. В этом случае анализ относится к 1 группе. Если клетки вступают в реакцию с реагентами «Анти-A» и «Анти-D», значит, у человека 2 тип (A).

Взаимодействие эритроцитов с цоликлонами типа «Анти-B» и «Анти-D» показывает, что у человека 3 группа (тип B). Если тельца вступили во взаимодействие со всеми видами цоликлонов, то у больного 4 группа крови (тип D). При выявлении группы крови при помощи этих реагентов не придется проводить дополнительную проверку, т.к. цоликлоны не имеют каких-либо добавок, вызывающих неправильную реакцию. Группа крови определяется в медицинском учреждении, анализ осуществляется в специальной лаборатории.

Таблица расшифровки результатов исследования:

Этот тест позволяет узнать жизненно необходимые данные о группе и резус-факторе пациента. Результаты позволяют оказать медицинскую помощь и перелить кровь больному после операции. Чтобы узнать свою группу, можно провести анализ в лаборатории любого медицинского учреждения. Информацию заносят в анкету пациента и хранят полученные данные в поликлинике в течение нескольких лет.

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора понадобится цоликлон анти- D. Он представлен бесцветной жидкостью и также продается в небольших флаконах с дозатором. Чтобы провести реакцию, достаточно одной дополнительной капли крови, которую помещают на планшете отдельно. Процедура проводится по следующей схеме:

  1. нанести каплю цоликлона анти- D объемом 0,1 мл на стекло;
  2. рядом добавить каплю крови, объем которой составляет 0,01 мл;
  3. стеклянной палочкой соединить две жидкости и аккуратно шевелить стекло, чтобы кровь перемешивалась и реагентом;
  4. спустя 3 минуты зафиксировать результат.

Первые результаты могут просматриваться через 15 секунд, но для установления окончательного результата важно подождать 3 минуты. Наличие результата, то есть появление реакции агглютинации, говорит о том, что резус-фактор положительный, его отсутствие свидетельствует об отрицательном резусе

Определение группы крови с помощью цоликлонов алгоритм и интерпретация результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным – использование цоликлонов.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

ГРУППЫ КРОВИ.

Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови. Каждой группе дано условное обозначение: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV). Установлено, что переливать можно только одногруппную кровь. В исключительных случаях, когда нет одногрупповой крови, а переливание жизненно необходимо, допустимо переливание иногруппной крови. В этих условиях кровь 0 (I) группы можно перелить боль­ным с любой группой крови, а больным, имеющим кровь AB (IV) группы, можно перелить донорскую кровь любой группы.

Поэто­му, прежде чем начинать переливание крови, необходимо точно установить группу крови больного и группу пере­ливаемой крови.

Процедура определения группы крови

Процедура, как определить группу крови с помощью цоликлонов, очень проста и проводится за несколько минут. Для нее потребуется нативная («живая») капиллярная кровь, допускается наличие в ней консерванта. Также понадобится планшет — плоская поверхность из стекла, на которой будет происходить реакция. Процедуру проводят по определенному алгоритму:

  1. нанести две большие капли цоликлонов на поверхность планшета (обычно реагент анти-А находится слева, а анти-В — справа);
  2. добавить небольшие капли крови, которые по объему будут в 10 раз меньше реагентов;
  3. аккуратно двигать планшет, чтобы кровь смешалась с раствором, но две капли не соединились друг с другом;
  4. через несколько минут наблюдать результаты.

Для установления группы подойдет и кровь с добавлением консерванта. Однако простота методики позволяет проводить ее на месте непосредственно после взятия биологического материала. Достаточно набрать небольшое количество капиллярной крови из пальца, чтобы ее полностью хватило для проведения анализа.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D по системе AB0 и системе Резус

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А , анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А

– цоликлон анти-В ;

– цоликлон анти-D ;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

Расшифровка результатов определения группы крови

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном , то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.
Определение резус-фактора цоликлоном Анти- D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh + )
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh — )

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными сыворотками

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки

Определение группы крови и резус фактора

Практически сразу после рождения у ребенка берется анализ крови на группу крови и резус-фактор. Эти данные остаются неизменными на всю жизнь. Однако не всегда родители запоминают группу крови и резус малыша.

Следовательно, не могут их сообщить, когда ребенок повзрослеет. Поэтому многие люди самостоятельно сдают анализ на группу крови и Rh. Современная медицина предлагает несколько методов определения группы крови и резус-фактора.

Вот самые популярные из них.

Цоликлоны для определения группы крови и резуса

Узнать группу крови можно с помощью цоликлонов. Этот довольно новый метод позволяет получить практически 100% достоверный результат.

Цоликлонами называются моноклинальные антитела, которые синтезированы благодаря разработкам генной инженерии из жидкой ткани стерильных мышей. Они используются для того, чтобы выявить, какая группа у крови по системе АВО.

Такой вид анализа выполняется в условиях лаборатории. Для получения достоверного результата во время исследования должны быть соблюдены ряд правил. Прежде всего, температура воздуха в помещении, где проводятся анализы, не должна быть ниже +15 градусов по Цельсию и выше +25 градусов по Цельсию.

Также в лаборатории должно быть хорошее освещение. Для выполнения анализа используются только качественные реагенты. Они не должны иметь замутнения и содержать хлопья. Для каждого реагента должна быть применена отдельная пипетка, чтобы не допустить смешивание.

Алгоритм действия в данном случае будет следующим. На двух противоположных сторонах тарелки выполняются надписи анти-А и анти-В, под которые лаборант помещает по 0,1 мл соответствующего цоликлона. Определить их можно по оттенку.

Так, у цоликлона анти-А он желто-розовый, а анти-В – синий. Далее, под реагент помещается капля крови. С помощью стеклянной палочки обе субстанции смешиваются.

После этого берется чистая палочка, и такая манипуляция выполняется с двумя другими субстанциями.

Если же процесса агглютинации нет, то цоликлон приобретает красный цвет. После этого происходит определение группы крови:

  • Если агглютинация не идет ни с одной, ни с другой стороны тарелки, то в эритроцитах нет антигенов А и В, следовательно, кровь принадлежит к первой группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-А, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген А. Следовательно, кровь принадлежит второй группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-В, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген В. Следовательно, кровь принадлежит к третьей группе.
  • Если процесс агглютинации идет в обоих случаях, то в эритроцитах есть антигены А и В. В такой ситуации рекомендуется сделать дополнительный анализ. Для его проведения берется капля крови пациента и смешивается с изотоническим раствором хлорида натрия в количестве 0,1 мл. Если при этом агглютинация не наблюдается, то определяют четвертую группу крови.

Данным методом можно также определить резус-фактор. Алгоритм будет таким же, как и при определении группы крови.

На белую тарелку помещается цоликлон анти-D, а рядом с ним капля крови пациента. Она должна быть в 10 раз меньше реагента. Обе субстанции смешиваются и в том случае, если агглютинация началась, то определяется положительный резус-фактор, в том случае, если нет, то резус-фактор отрицательный.

Методика определение группы крови по системе АВО

Как определить группу крови по системе АВО? Методика распознания группы крови и резус-фактора по системе АВО не менее популярна, чем предыдущая. Исследование также проводится в лабораторных условиях. Техника выполнения анализа по системе АВО проста.

К ним добавляются капли крови, размеров раз в 10 меньше. Затем, субстанции смешиваются, и наблюдается реакция. Спустя 5 минут, лаборант может начать расшифровку. Оценивается агглютинация, при которой возникают хлопья, а сыворотка становится бесцветной.

Метод АВО выдает такие результаты:

  • агглютинации нет нигде, следовательно, у человека первая группа крови;
  • агглютинация идет в сыворотках О и В, значит, кровь 2 группы;
  • агглютинация идет в сыворотках О и А, значит, кровь 3 группы;
  • агглютинация идет во всех сыворотках АВО, значит, требуется дополнительное исследование, в котором будет задействована сыворотка для определения четвертой группы. Если в данном случае процесс агглютинации не состоялся, значит, исследуемая кровь относится к 4 группе.
Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector